细胞培养（细胞培养基）

本文目录一览：

• 1、什么是细胞培养,细胞培养成功的关键因素是什么
• 2、细胞培养的基本方法有哪些
• 3、进行动物细胞培养的常用条件是
• 4、细胞培养步骤
• 5、细胞培养需要的实验耗材有哪些
• 6、细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项

什么是细胞培养,细胞培养成功的关键因素是什么

细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单细胞培养的单细胞或极少分化的多细胞细胞培养，这是克隆技术必不可少的环节细胞培养，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。

⑴ 细胞培养是指在体外模拟体内的生理环境细胞培养，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术。

细胞培养是指从体内组织取出细胞摹拟体内出现环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使期生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。

从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 细胞培养是指细胞在体外条件下的生长，动物细胞在单独细胞培养的过程中不再形成个体。

在培养的过程中细胞不再形成组织（动物）。 培养物是单个细胞或细胞群。

粉末细胞培养基的配制（以1 升为例）细胞培养：细胞培养基通常须添加10％血清，因此粉末培养基之配制体积为900 ml，pH 为 2 - 4。

细胞培养的基本方法有哪些

细胞悬浮法。特点细胞培养：可以增加培养细胞与培养液的接触面细胞培养，促进营养吸收；可以带走培养物产生的有害代谢产物，避免高浓度积聚对细胞的伤害；保证良好的混合状态，从而获得良好的气体传递效果。固定化培养。

细胞接种：将培养基加入含有细胞的培养皿中，使细胞悬浮在培养基中。可以使用细胞传代或原代培养方法，根据需要调整初始细胞密度。培养条件控制：确定适当的培养条件，包括温度、湿度、CO2浓度和氧气浓度。

细胞培养常用方法 细胞原代培养（primay culture） 又称初代培养，即直接从机体取下细胞、组织、或器官、让他们在体外维持与生长。

有限稀释法是一种常用的克隆方法。将需要再克隆的细胞株自培养孔内吸出并作细胞计数，计出1mL的细胞数。用HT培养液稀释， 使细胞浓度为50～60个/mL，于96孔培养板中每孔加0.1mL（五六个细胞/孔）。

进入细胞间开始细胞培养时，必须严格按照下列步骤操作：①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。

细胞培养 指以单个游离细胞（如用果酸酶从组织中分离的体细胞，或花粉细胞，卵细胞）为接种体的离体无菌培养。原生质体培养。

进行动物细胞培养的常用条件是

无菌、无毒的环境 对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。此外应定期更换培养液，以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。

动物细胞培养技术的主要要求是无菌、无毒的环境，适宜的温度和pH，O2等气体环境。无菌环境 无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。

无菌无毒环境、营养等。对培养液和所有培养用具进行无菌处理；在细胞培养液中添加一定量的抗生素。

细胞培养步骤

1、细胞复苏 将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。加入10mlDMEM培养基清洗，弃上清液。

2、将细胞转移到一15ml Falcon管中；加入5ml ES培养基（用培养基冲洗冻存管）；离心3分钟；弃上清，用2ml ES培养基重悬细胞，至少吹打10次；接种在明胶包被（见下文）的6孔或6cm组织培养皿；孵育。

3、复苏 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后（大概1-5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

4、吸出细胞培养液，放入离心管中，离心1000rpm5分钟。（2）吸掉上清液，加入适量之新鲜培养基，混和均匀后，依稀释比例转移至新的培养瓶中，以正常培养条件培养。

细胞培养需要的实验耗材有哪些

. 细胞培养器具：如细胞培养瓶、细胞培养皿、移液管等。

恒温培养箱：应选隔水式或晶体管式自控温培养箱，此类培养箱灵敏度高，温度控制较稳定。一般的恒温培养箱价格较便宜，其缺点是只宜于作密闭式培养。（2） CO2培养箱：目前多数的细胞培养室已广泛使用。

重要的实验仪器蒸馏器、储品柜、超净工作台、水浴锅、三氧消毒杀菌机。细胞培养的无菌操作需要在无菌台上操作。

金属制品：水龙头、样品匙（药勺）、坩埚铁架台、滴定台、试管架、坩埚钳、酒精喷灯、夹子、镊子、实验剪刀、升降台、本生灯等。

细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项

1、以1：2或1：3进行分装，补充新鲜培养基，并在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，37℃CO2培养箱培养。细胞培养24h后，即可观察培养液的颜色及细胞的生长情况。

2、细胞处理后的第二天，在显微镜下观察细胞状态，如死细胞较多且细胞密度较低，需要进行换液操作。 （1）悬浮细胞请在高倍镜下观察，一般而言，活细胞轮廓圆润、界限清晰、透明度大、折光性强。

3、细胞培养是在实验室中通过人工方法培育和繁殖细胞的过程，细胞培养的一般步骤包括：细胞株选择和准备、培养基配制和消毒、细胞接种、培养条件控制、细胞培养和维护、细胞检测和鉴定。

4、取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。

5、无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在活体内，解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵，但细胞在体外培养的过程中，缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的解毒能力。

6、【注意事项】 液体培养基贮存于4 ℃冰箱，避免光照，实验进行前放在37℃水槽中温热。 液体培养基（加血清） 存放期为六个月，期间glutamine 可能会分解，若细胞生长不佳，可以再添加适量glutamine。